動物/細胞トータルRNAアイソレーションキットに関するFAQ

動物組織/細胞RNA抽出で遭遇する可能性のある問題の以下の分析は、実験に役立ちます。さらに、操作手順や問題分析に加えて、その他の実験的または技術的な問題については、専用の技術サポートを提供しています。必要な場合は、028-83360257またはE-mali：Tech@foregene.comまでご連絡ください。

RNAが抽出されていないか、RNAの収量が少ない

多くの場合、回収効率に影響を与えるさまざまな要因があります。たとえば、組織サンプルのRNA含有量、操作方法、溶出量などです。

1.操作中に氷浴または極低温（4°C）遠心分離を行いました。

推奨事項：プロセス全体を通して室温（15〜25°C）で操作し、氷浴や低温での遠心分離は行わないでください。

2.不適切なサンプル保存または過剰なサンプル保存時間。

推奨事項：サンプルを-80°Cで保存するか、液体窒素で凍結し、凍結融解を繰り返し使用しないようにします。RNA抽出には新鮮な組織または培養細胞を使用してみてください。

3.不十分なサンプル溶解。

推奨事項：組織をホモジナイズするときは、組織が十分にホモジナイズされていること、および組織細胞がRNAの放出を説明するために十分に分割されていることを確認してください。

4.溶離液が正しく追加されていません。

推奨事項：RNaseフリーのddH2Oが精製カラムメンブレンの中央に滴下されていることを確認します。

5.正しい量の無水エタノールがBufferRL2またはBufferRW2に追加されませんでした。

推奨事項：指示に従い、バッファーRL2とバッファーRW2に正しい量の無水エタノールを加え、キットを使用する前によく混合します。

6.組織サンプルの投与量は適切ではありません。

推奨事項：組織を過剰に使用するとRNA抽出が低下する可能性があるため、500μlのバッファーRL1あたり10〜20 mgの組織または（1〜5）×106個の細胞を使用してください。

7.不適切な溶出量または不完全な溶出。

推奨事項：精製カラムの溶出量は50〜200μlです。溶出効果が十分でない場合は、予熱したRNaseフリーddH2Oを添加した後、たとえば5〜10分間、室温での配置時間を延長することをお勧めします。

8.バッファーRW2洗浄後、精製カラムにエタノール残留物があります。

推奨事項：Buffer RW2洗浄、空管遠心分離の1分間後にエタノール残留物がある場合、空管遠心分離操作の時間を2分に増やすか、精製カラムを室温で5分間置いて、残留物を適切に除去することができます。エタノール。

精製されたRNAは分解されます

精製されたRNAの品質は、サンプルの保存、RNaseのコンタミネーション、操作などの要因に関係しています。

1.組織サンプルが間に合わない。

推奨事項：組織サンプルまたは細胞が収集後に適時に使用されない場合は、すぐに-80°Cまたは液体窒素で凍結保存してください。RNAを抽出するには、可能な限り、新しく採取した組織または細胞サンプルを使用します。

2.組織サンプルの凍結融解を繰り返します。

推奨事項：組織サンプルを保存する場合は、保存のために小片に切断し、使用する場合はサンプルの凍結融解とRNAの分解を繰り返さないように片方を取り除くのが最善です。

3. RNaseが導入されているか、手術中に使い捨て手袋やマスクなどを着用していない。

推奨事項：RNA抽出実験は、別々のRNA操作室で行うのが最適であり、実験前にテーブルをクリアします。

RNaseの導入によるRNA分解を最小限に抑えるために、実験中は使い捨ての手袋とマスクを着用してください。

4.試薬は使用中にRNaseで汚染されています。

推奨事項：関連する実験のために、新しい動物トータルRNA分離キットと交換してください。

5. RNA操作に使用する遠心チューブやチップなどは、RNaseで汚染されています。

推奨事項：RNA抽出に使用する遠心チューブ、チップ、ピペットなどがすべてRNaseフリーであることを確認してください。

得られた精製RNAは下流の実験に影響を与える

精製カラムで精製されたRNA、塩イオン、タンパク質含有量が多すぎる場合、逆転写、ノーザンブロットなどの下流の実験に影響を与えます。

1.溶出したRNAには塩イオン残基があります。

推奨事項：バッファーRW2に正しい量のエタノールが添加されていることを確認し、操作用に示された遠心速度で2回の精製カラム洗浄を実行します。塩イオン残留物がある場合は、精製カラムをバッファーRW2に室温で5分間放置し、遠心分離を行って塩汚染を最大限に除去します。

2.溶出したRNAのエタノール残留物。

推奨事項：バッファーRW2洗浄後、操作に示された遠心分離速度で空管遠心分離操作を実行するか、エタノール残留物が残っている場合は空管遠心分離操作の時間を2分に増やすか、室温で5分間放置することを確認します。エタノール残留物の除去を最大化するための空のチューブ遠心分離の数分後。