LNCRNAの逆のトランスクリプションの効率を改善する方法か。

鉛

長い非コーディングのRNA、lncRNAは200-100000 nt間の長さの大きいヌクレオチドより200が付いている非コーディングのRNA、一般にである。lncRNAは後成で遺伝子発現を、トランスクリプションおよび後transcriptionalレベル調整し、沈黙するX染色体捺印するゲノムに加わり、クロマチンの修正、トランスクリプション活発化、トランスクリプション干渉、核輸送、細胞周期の規則、細胞分化の規則および線量の補償の効果（適量の補償の効果）および他の多くの重要な正規プロセスは人間の病気の発生、開発および防止と密接に関連し、現在生物医学の分野のホット スポットの1つである。

01のタイプそして特徴のLncRNA

lncRNAは上記の図に示すように形成の異なったもとに従って多くのタイプに、分けられる。次の特徴を持っている:

1. lncRNAsは通常微分の間に動的表現および異なった接続方法とより長い、
2.遺伝子のコーディングと比較されて、lncRNAに通常より低い表現のレベルがある
3。ほとんどのlncRNAsにティッシュの微分および開発の過程において明らかで一時的で、空間的な表現の特定性がある
4。腫瘍および他の病気に独特の表現がある
5。lncRNAの細胞レベル下の位置は多様である
6。順序は保存で低いが、機能にある特定の程度の保存、等がある。

LncRNAの逆のトランスクリプションについての02のよくでる質問

細胞、長い長さおよび高レベル構造のlncRNAの低い内容が原因で、そのようなRNAに頻繁に茎のループまたはヘアピンのような複雑な構造があり、RTqPCRは不成功な逆のトランスクリプションまたは低効率の問題に傾向がある。

03 LncRNAの逆のトランスクリプション解決

中央規則では、型板が逆のトランスクリプションと呼ばれるようにRNAを使用してDNAを総合する自身の逆のtranscriptaseを使用してRNAのウイルスのプロセス。cDNAの型板を総合するのにRNAのウイルスの逆のtranscriptaseを使用するプロセスは生体外で逆のトランスクリプションと呼ばれる。主要な要素は逆のトランスクリプション システムに含んでいた:RNAの型板、逆のtranscriptase、プライマーおよび他の部品。

1.RNA型板

逆のトランスクリプションのRNAの型板の影響は構造、純度および完全性に反映される。より高い得られたRNA、より高く逆のトランスクリプションの効率およびより正確の純度そして完全性それに続く量的な結果。一般的なRNAの抽出の試薬によって浄化されるRNAは頻繁にほとんどの逆のtranscriptaseに対する強く抑制的な効果をもたらすアルコールおよびグアニジンの塩の残余を含んでいる。

2.Reverse transcriptase

逆のtranscriptaseに全体の逆のトランスクリプション システムで主影響がある。ほとんどの実験室で使用される逆のtranscriptaseのための適した温度は一般に実際42°C.である、高レベルRNAの構造の開始はより高い温度を要求し、逆のtranscriptaseのための条件はより高い。

3.Primer

逆のトランスクリプション プライマーは遺伝子特定のプライマー、任意プライマーおよびOligo dTのプライマーを含んでいる。ほとんどのlncRNAsはpolyA尾を含まないし、きちんとOligo dTに任意プライマーをマッチさせることは重要である。

4.Other部品

RNAが低下し特に易いという事実の点から見て効果的にRNaseの記入項目を防ぎ、逆のトランスクリプションの滑らかな進歩を保障できる逆のトランスクリプション システムの部品の導入は最小にすることができる。

ForegeneはqPCRにRNAの型板から、逆のトランスクリプション包括的に護衛するあなたのlncRNAの検出を得る

動物の総RNAの分離のキット（gDNAの取り外しのコラムと）

細胞の総RNAの分離のキット（gDNAの取り外しのコラムと）

Lnc RT HeroTM I （gDNase） （lncRNAからの最初の繊維のcDNAの統合のための極度の予混合と）

実時間PCR EasyTM-SYBRの緑I

RNAの抽出の利点:

キットは第三世代のRNAの抽出の技術、DNaseを使用する必要性を使用しない。

96からの11分、24、12、および6-well細胞、gDNAなし、高純度の、良質の総細胞のRNAの高性能の抽出を平板培養。

lncRNAの逆のトランスクリプションの利点:

LncRNAがすぐにゲノムDNAの汚染を取除くことができるように特に開発される逆のトランスクリプション システム。

逆のトランスクリプション システムに高い熱安定性があり、まだ50°C.でよい逆のトランスクリプション性能がある。

高いGCの内容および複雑な二次構造が付いている型板は高性能と逆転させることができる。

qPCRの利点:

ホット スタートのForegene Taqのポリメラーゼにより高い拡大の効率、より高い拡大の感受性およびより高い拡大の特定性がある。

最大限に活用された実質PCRの容易な組合せは私により高い検出の感受性がある、蛍光性の強度は異なったタイプの蛍光性の量的な実験の必要性を満たすことができる、同じようなプロダクトの3-5回であるSYBRの緑を作り。