lncRNA Cat.No.RTL-09098/09099からの最初の繊維のcDNAの統合のためのLnc RT HeroTM Iの（gDNaseと）極度の予混合

Lnc RT HeroTM I （gDNaseと）

lncRNAからの最初の繊維のcDNAの統合のための極度の予混合

Cat.No.RTL-09098/09099

記述:

lncRNAがすぐにゲノムDNAの汚染を取除くことができるようにLnc RT HeroTM Iは（gDNaseと）特に開発される逆のトランスクリプション システムである。5×gDNase組合せは効果的にqPCRの結果のゲノムの干渉を避ける2分の42°CですぐにRNAの残りのゲノムを取除くことができる。

5×L-RT HeroTMの組合せは特により強いRNAの類縁およびより高い逆転の録音の効率のlncRNAそして他の長いRNAの複雑な型板のための逆のtranscriptaseのとりわけ新型、であるForegeneによって開発されるForegene LncRNAの逆Transcriptaseを含んでいる。最大限に活用されたシステムは逆のトランスクリプション率をより速く作り、容易に高いGCの内容および複雑な二次構造が付いているRNAの型板を転写できる。最初の繊維のcDNAの統合は15分の42°Cで完了することができる。

指定:

25×20μl Rxns、50×20μl Rxns

キットの部品

キットの構成情報

-5×gDNaseの組合せ:代理店、取除くgDNA RTの反作用の前に操作指示に従って試薬を使用することは必要行われるである（内部グリセロールの内容は凍り正常な現象に属する）凍っていないかもしれない。

- 5×L-RT HEROTMの組合せ:Foregene Lncrnaの逆Transcriptase、RNaseの抑制剤を、DNTPS、Stabiliferの増強物、オプティマイザ、Oligo （DT） 18プライマー含んでいる）。

Features&advantages:

- 2分以内の型板のgDNAを取除くことができるgDNAを取除く有効な機能。

-それは効率的にlncRNAのトランスクリプションを逆転できる。逆のトランスクリプション プロダクトがqPCRに服従するとき、Ctの価値は慣習的な逆のトランスクリプション システムのそれより低い。

-有効な逆のトランスクリプション システム、最初の繊維のcDNAの統合を完了するために15分だけかかる。

-複雑な型板:高いGCの内容および複雑な二次構造が付いている型板はまた高性能と逆転させることができる。

-高感受性の逆のトランスクリプション システムはまた、ページ レベルの型板良質のcDNAを得ることができる。

-逆のトランスクリプション システムに高い熱安定性がある、最適の反作用の温度は42℃であり、まだ50℃でよい逆のトランスクリプション性能がある。

型板のRNAの条件

RNAを使用することが最善得た新しいサンプルからまたは-80 °C.で維持されてである。

- 型板の完全性:よい完全性、低下無し。

- 型板純度:RNAに含まれていたイオン、蛋白質、エチレンジアミン四酢酸、エタノール、フェノールおよび他のジャーナルはtranscriptaseの活動を逆転させ、最終的に逆のトランスクリプション効果に影響を与えるために影響を与える。

型板のRNAの適量

- lncRNAのため:10ng-1 μgの総RNA/20 μlシステム。

- 概要のRNAのため:0.1pg-1 μgの総RNAか0.01pg-0.1 μg mRNA/20のμlシステム。

キットの構成情報

- 5×gDNase組合せ:代理店、取除くgDNA RTの反作用の前に操作指示に従って試薬を使用することは必要行われるである（内部グリセロールの内容は凍り正常な現象に属する）凍っていないかもしれない。

- 5×L-RT HEROTMの組合せ:Foregene Lncrnaの逆Transcriptase、RNaseの抑制剤を、DNTPS、Stabiliferの増強物、オプティマイザ、Oligo （DT_{） 18}プライマー含んでいる）。

注意:（キットを使用する前に注意を注意深く読みなさい）

- 型板は新しいサンプルを使用することを推薦しまたはRNAは-80 °以下C維持し（RNAは避ける繰り返されたfreeze-thawべきで、RNAの完全性、低下を保障しない）。

- RNASEの汚染を避けるためには、実験操作はRNaseなしのスペースで遂行される;銃の頭部およびPCRの遠心分離機はRNASEなしであるために保証されなければならない;そして使い捨て可能な手袋およびマスクを身に着けなさい。

- 使用する前に、それを作るために完全に溶ける5つの×のGDNaseの組合せおよび5 × L-RT HEROTMの組合せは氷に置かれ軽い弾丸は混合される;システムは改善するキットPCRの拡大の特定性の性能を作り出されたり、氷浴でキットの性能を改善するために作動する。

- 5 × L-RT HEROTMの組合せは付加的で付加的なプライマーへプライマーを加えないで最大限に活用された比率の逆のトランスクリプション プライマーを加えた。

- 二次構造の複雑なRNAの型板のために、反作用の温度は50 °にC増加することができる

ワークフロー:

貯蔵および保存性:

極度の予混合PCRのキットはレシートの直後の-20°Cで一定した温度冷却装置で-20°C.で貯えるプロダクトを貯えられるべきである。貯蔵条件が適切なら、プロダクトは1年の妥当性の期間の間に性能を低下させない。

問題解析ガイド

次はあなたの実験に有用であることを望むLnc RT HeroTM I （gDNaseと）シリーズ キットの使用で見つけられるかもしれない問題の分析である。さらに、私達は操作指示および質問を越える他の実験か技術的な問題との助けるためにテクニカル サポートを捧げた。必要性があったら、私達に連絡しなさい:028-83361257または電子メール:Tech@foregene.com。

無指定の拡大

1. 不合理なプライマー設計

推薦:プライマー設計原理に従う設計プライマー。

2. ゲノムの残余。

提案:gDNAの取り外しの反作用の温度の第一歩が42°Cである、また点爆時間5minに延長である場合もあることを確かめれば。

RTqPCRによる拡大信号無し

1. RNAは低下する。

推薦:RNAの抽出のための材料はできるだけ新しい良質および高純度のRNAは使用されるべきである。

2. RNAは抑制剤を含んでいる。

推薦:逆のトランスクリプション抑制剤は一般にSDS、グアニジンの塩、エチレンジアミン四酢酸、等を含んでいる。抑制剤を取除くために70%のエタノールが付いているRNAの沈殿物を洗浄することを推薦する。

3. プライマー設計に関する問題。

推薦:プライマー設計原理に従って、点検のためのプライマーを設計し直しなさい。

ターゲット バンドは空白制御で現われる

1. 作動用具または試薬の汚染。

推薦:実験のためのすべての試薬か装置はオートクレーブに入れられるべきである。注意深く、穏やかピペットにDNAのサンプルが防ぐために扱った場合でまたは遠心分離機管から吸われることをこぼれた。

2. 汚染はPCRの反作用システムの準備の間に行われた。

推薦:、のような扱った場合必要な注意を取りなさい:フィルター先端を使用して身に着けている乳液の手袋。汚染防止システムで実時間PCRの組合せを使用しなさい。

3. プライマーは低下する。

提案:プライマーが低下する使用し、蛍光性の検出の実験のための新しいプライマーによって取り替えなさいかどうか検出するのにSDS-PAGEの電気泳動を。