RT-QPCR EasyTM - SYBRの緑I Cat.No.RT - ROXの参照の染料が付いている02111/02112の1つのステップ リアルタイムRT PCRのマスターの組合せ

RTqPCR EasyTM （1つのステップ） - SYBRの緑I Cat.No.RT - ROXの参照の染料が付いている02111/02112のワン・ステップ実時間RT-PCRのマスターの組合せ

RTqPCR EasyTM （1つのステップ） - SYBRの緑I

Cat.No.RT - 02111/02112

ワン・ステップ実時間RT-PCRのマスターの組合せ

研究の使用だけのため

-20℃の店

製品紹介

RTqPCR EasyTM （1つのステップ） - SYBRの緑Iuses効果的にすぐに遺伝子の量的な検出を完了できる実時間PCRの反作用結合する独特なシステムおよびRTを。プロダクトに強い許容、高い特定性および安定性がある。プロダクトは会社のより速い拡大（2Kb/min）、高い拡大の効率、強い特定の拡大の能力およびTaqの通常の酵素と比較される低い不適当な組み合わせ率の利点がある独特なForegene HotStar TaqのDNAポリメラーゼを含んでいる。それは無指定の拡大を減らし、PCRの正確さを改善することができる実時間RT-PCRがようにここに使用される。

特徴

ワン・ステップ キットは逆のトランスクリプションを作り、同じ管のqPCR 2の反作用は、ただ型板のRNA、特定のPCRのプライマーおよびRNaseなしのddH2Oを加える必要がある。

キットは迅速かつ効率的に量的にウイルスのRNAか跡のRNAを分析できる。

キットは効果的に反作用の拡大の効率そして特定性を改善するために独特な反作用システムと結合される独特なForegeneの逆のトランスクリプション試薬およびForegene HotStar TaqのDNAポリメラーゼを使用する。

最大限に活用された反作用システムは反作用を持っているより高い検出の感受性、より強い熱安定性およびよりよい許容をする。

RTqPCR EasyTM （1つのステップ） - SYBRの緑IのキットはROXの顧客が量的なPCRの器械の異なったモデルで使用することができるがように便利であるおよび井戸の間で信号の背景を信号の間違い除去するのに使用することができる内部参照の染料と来る。

キットの内容

輸送および貯蔵条件

1.Transportation状態

低温冷蔵庫の交通機関の全プロセス、キットが状態にのあることを確認するため <4>

2. 貯蔵条件

• キットは-20℃で貯えられる。レシートの直後の-20℃で一定した温度冷却装置でプロダクトを貯えなさい。貯蔵条件が適切なら、プロダクトは1年の妥当性の期間の間に性能を低下させない。
• 2×RT-qPCR EasyTMの組合せSYBRの部品はSYBRの緑Iを、保つライトからのそれを含んでいる。

キットの構成情報

2× RTqPCR EasyTMの組合せSYBR:Foregeneの逆TranscriptaseのRNaseの抑制剤、Foregene HotStar TaqのDNAポリメラーゼ、dNTPs、SYBR GreenI、Mg2+、安定装置、増強物およびオプティマイザの最大限に活用された比率。

ROXの参照の染料:ABIおよびStratageneのような会社の実時間PCRのアンプで一般にPCRのサンプル ロード エラーによって引き起こされるPCRの管と管の違いを調節することを使用する。異なった器械によって必要なROXの参照の染料の集中は異なって、ユーザーは器械の推薦された集中に従ってそれを加えることができる。

注意:（キットを使用する前に注意を注意深く読みなさい）

試薬は繰り返された凍り、分解を避けるべきである他では試薬の性能は無効に減るか、またはなる。

キットの試薬はライトから保護され、-20°C.で貯えられるべきである。

貯えられる-80°Cで新しいサンプル抽出か型板のRNAを使用することを推薦する（RNAは繰り返された凍り、分解を避けるべきである）。

RNaseの汚染を避けるためには、RNaseなしのスペースで実験を行いなさい;ピペットの先端および使用されるPCRの管はRNaseなしでなければならない;そして使い捨て可能な手袋およびマスクを身に着けなさい。

このキットは実験のために特定のプライマーによって使用されなければならない。遺伝子が実験の必要性に従って増幅されることができるように特定のプライマーを選びなさい。

使用の前に、氷の溶解、軽打および組合せの使用に2×RT-qPCR EasyTMの組合せSYBR Iをよりかなり前に完全に置きなさい;システムの準備は氷浴でキットの性能を改善し、PCRの拡大を高めるために特定性作動するべきである。

2×RT-qPCR EasyTMの組合せSYBRはSYBRの緑Iを、避ける強いライトを含んでいる。

型板のRNAの集中

RTqPCR EasyTM （1つのステップ） - SYBRの緑I:（0.1pg-100ng合計のRNA）/20μlシステム。

操作ガイド

:材料および試薬の準備

1. 準備されたRNAの型板（RNAを得、浄化するのにForegeneの合計のRNAの分離のキット シリーズ キットを使用することを推薦する）、特定のプライマー（10μM）および関連の消耗品および器械準備しなさい。

注:RNAの完全性を保障し、新しいサンプルから得られるRNAを使用するために試みなさい。

2. 自然に溶け、使用まで混合するために管の壁を打つようにそれがする氷の置かれた2×RT-qPCR EasyTMの組合せSYBR、RNaseなしのddH2Oおよび50×ROX参照の染料（必要ならば）。

B:RTqPCRシステム準備

2× RTqPCR EasyTMの組合せSYBRは使用してが便利、速くすばらしい範囲に反作用システムの多数の準備によって引き起こされる操作および実験間違いの間に汚染を避ける。、反作用システムの容積半分だけ（反作用システムが使用するとき20μlなら例えば、取得10μl 2×RT-qPCR EasyTM組合せSYBRの解決）、RNAの型板および特定のプライマーを加え、容積を構成するためにRNaseなしのddH2Oを加える。特定のRTqPCR反作用システム準備のために表1を次参照しなさい

形態1:RTqPCRシステム準備

1*:通常プライマーの最終的な集中はよりよい結果を得る0.2-0.25μMである。反作用の性能が粗末なとき、プライマー集中は0.1-0.5μMの範囲の内で調節することができる。

注:前方プライマーおよび逆のプライマーはターゲット遺伝子のための特定のプライマーである。

2*:異なった量的なPCRの器械に従ってROXの参照の染料の適切で最終的な集中を選びなさい。共通の量的なPCR機械のためのROXの参照の染料の最適の集中は次のテーブルで示されている:

C:RTqPCR反作用システム設定

• 上のテーブルについてのRTqPCRシステムを、組合せ穏やかに準備した後（にピペット ピペットの先端を穏やかに使用できる;また管の壁か管の帽子で、および場所後で使用できるように分散する液体を集める冷蔵庫のvortexerおよび遠心分離機で簡潔に混合できる）。

2. RTqPCR反作用プログラム設定（反作用の温度そして時間を置く表2）を参照しなさい。

注:2×RT-qPCR EasyTMの組合せSYBRの活動を保障し、拡大の効率を改善するために、PCRの器械プログラムをセットアップした後RTqPCR反作用システムを準備することが最善であるシステム準備が完了する直後に反作用プログラムが入れることができるように。

3. 最もよいqPCRの効果を得るためには、勾配PCRが異なった型板および異なったプライマーのための反作用の条件を最大限に活用するのに使用することができる。

注:Foregene Hotstar TaqのDNAポリメラーゼの延長温度較差はこのキットで次のとおりである提供した:60-72℃および最もよい延長温度は72℃である。

次はRTqPCR反作用の状態の例である。PCRの反作用のためにツー ステップ方法を使用することを推薦する。型板の集中により無指定の拡大を引き起こすには余りにも低いとき低いプライマーTmの価値は低い拡大の効率をもたらすまたは悪い拡大のカーブの反復性、等のPCRの反作用のためのスリー ステップ方法を試みることを推薦する。表2-1 （ツー ステップ方法）およびRTqPCR反作用の状態の設定のための表2-2 （スリー ステップ方法）を参照しなさい。

形態2-1:RTqPCR反作用プログラム配置（ツー ステップ）

形態2-2:RTqPCR反作用プログラム配置（スリー ステップ）

1*:逆のトランスクリプション時間は実験必要性に従って調節することができる。βアクチンのような一般的な内生遺伝子は10分だけを必要とする;特定の表現された遺伝子を検出するため、逆のトランスクリプション時間は必要とされるに応じて適切に延長である場合もある。

2*:増幅されたターゲット片の長さに従って特定時を置きなさい。Foregene HotStar TaqのDNAポリメラーゼの拡大の速度は2kb/min.である。

注:PCRの反作用の状態は型板、プライマー、等の構造条件によって変わる。複雑な二次構造が付いているRNAの型板のために、逆のトランスクリプションの第一歩のために42℃を使用することを推薦する。特定の操作では、ターゲット片のサイズのような特定の条件に従って最適の反作用の状態を、増幅された片の基礎順序および焼きなましの温度、延長時間、等を含むプライマーのGCの内容および長さ、設計することは必要である。

操作の図表

注意:（キットを使用する前に注意を注意深く読みなさい）

-試薬は繰り返された凍り、分解を避けるべきである他では試薬の性能は無効に減るか、またはなる。

- キットの試薬はライトから保護され、-20°C.で貯えられるべきである。

- 貯えられる-80°Cで新しいサンプル抽出か型板のRNAを使用することを推薦する（RNAは繰り返された凍り、分解を避けるべきである）。

- RNaseの汚染を避けるためには、RNaseなしのスペースで実験を行いなさい;ピペットの先端および使用されるPCRの管はRNaseなしでなければならない;そして使い捨て可能な手袋およびマスクを身に着けなさい。

- このキットは実験のために特定のプライマーによって使用されなければならない。遺伝子が実験の必要性に従って増幅されることができるように特定のプライマーを選びなさい。

- 使用の前に、氷の溶解、軽打および組合せの使用に2×RT-qPCR EasyTMの組合せSYBR Iをよりかなり前に完全に置きなさい;システムの準備は氷浴でキットの性能を改善し、PCRの拡大を高めるために特定性作動するべきである。

- 2×RT-qPCR EasyTMの組合せSYBRはSYBRの緑Iを、避ける強いライトを含んでいる。