RT-QPCR EasyTM （1つのステップ） - Taqman Cat.No.RT - 02131/02132のワン・ステップ実時間RT-PCRのマスターの組合せ

Cat.No.RT - 02131/02132

ワン・ステップ実時間RT-PCRのマスターの組合せ

RT-PCR EasyTM I （1つのステップ）

Cat.No.RT - 02011/02012

ワン・ステップRT-PCRのマスターの組合せ

研究の使用だけのため

-20℃の店

製品紹介

Foregeneワン・ステップRT-PCR EasyTMシリーズ プロダクトはPCRが同じ反作用の遠心分離機管で拡大逆転させ、実験ステップを簡単にし、同じ反作用システムが実験プログラムを最大限に活用し、実験の効率を完了することをRNAからのdouble-stranded DNAへの統合された反作用が、すなわち、トランスクリプションを改善することを実現する。

RTqPCR EasyTM （1つのステップ） - Foregene HotStar TaqのDNAポリメラーゼを使用してTaqman、最大限に活用されたTaqmanのqPCRシステムすぐにそしてとりわけ跡のRNAの型板の実時間RTqPCR量的な検出を行うことができる。

特徴

- ワン・ステップ キットは逆のトランスクリプションを可能にし、同じ管で遂行されるべきPCRはただ型板のRNA、特定のPCRのプライマーおよびRNaseなしのddH2Oを加える必要がある。

- ウイルスのRNAまたは跡のRNAの実時間定量分析はすぐにそして正確に遂行することができる。

- キットは効果的に反作用の拡大の効率そして特定性を改善するために独特な反作用システムと結合される独特なForegeneの逆のトランスクリプション試薬およびForegene HotStar TaqのDNAポリメラーゼを使用する。

- 最大限に活用された反作用システムは反作用を持っているより高い検出の感受性、より強い熱安定性およびよりよい許容をする。

- RTqPCR EasyTM （1つのステップ） - TaqmanのキットはROXのエンド ユーザーが量的なPCRの器械の異なったモデルで使用することができるがように便利であるおよび井戸の間で信号の背景を信号の間違い除去するのに使用することができる内部参照の染料と来る、

製品品質の制御

FOREGENの総合的品質管理システム（FOREGENEの各キットのバッチの質、信頼性および安定性を保障する総合的品質管理システム）に従って、RT-PCR EasyTM Iの（1つのステップ）キットの各バッチは厳しく多数の時テストされる。

キットの内容

輸送および貯蔵条件

1.Transportation状態

低温冷蔵庫の交通機関の全プロセス、キットが状態にのあることを確認するため <4>

2. 貯蔵条件

RT EasyTM私はレシートの直後の-20°Cで一定した温度冷却装置で-20°C.で貯えるプロダクトを貯えられる。貯蔵条件が適切なら、プロダクトは1年の妥当性の期間の間に性能を低下させない。

キットの構成情報

2× RT-PCR EasyTMの組合せ:Foregeneの逆Transcriptase、RNaseの抑制剤、Foregene HotStar TaqのDNAポリメラーゼ、dNTPs、Mg2+、反作用の緩衝、オプティマイザおよび安定装置、等。

注意:（キットを使用する前に注意を注意深く読みなさい）

型板のために、新しいサンプルから得られるか、または貯えられる-80℃でRNAを使用することを推薦する（RNAは繰り返された凍り、分解を避けるべきである）。

RNaseの汚染を避けるためには、実験操作はRNaseなしのスペースで遂行されるべきである;ピペットの先端および使用されるPCRの遠心分離機は管RNaseなしでなければならない;そして使い捨て可能な手袋およびマスクは身に着けられているべきである。 使用の前に、氷の溶解、軽打および組合せの使用に2×RT-PCR EasyTMの組合せをよりかなり前に完全に置きなさい;システムの準備は氷浴でキットの性能およびPCRの拡大の特定性を改善するために作動するべきである。

型板のRNAの集中

RT-PCR EasyTM I （1つのステップ）:（0.1pg-1μg合計のRNA）/20μlシステム

キットの塗布

- このキットは高コピーおよび低コピーの遺伝子の急速な検出のために使用される。

- それは高いGCの満足か複雑な二次構造が付いているRNAの型板の急速な検出のために特に適している。

製品品質の制御

FOREGENの総合的品質管理システム（FOREGENEの各キットのバッチの質、信頼性および安定性を保障する総合的品質管理システム）に従って、RT-PCR EasyTM Iの（1つのステップ）キットの各バッチは厳しく多数の時テストされる。

操作ガイド

:材料および試薬の準備

1. 準備されたRNAの型板（RNAを得、浄化するのにForegeneの合計のRNAの分離のキット シリーズ キットを使用することを推薦する）、特定のプライマー（10μM）および関連の消耗品および器械準備しなさい。

注:RNAの完全性を保障し、新しいサンプルから得られるRNAを使用するために試みなさい。

2. 自然に溶けるように後で使用できるようによく混合するためにそれがする氷浴の場所2× RT-PCR EasyTMの組合せそしてRNaseなしのddH2Oはおよび管の壁を打つ。

B:RT-PCRシステム準備

2×RT-PCR EasyTMの組合せは使用してが便利、速く汚染をすばらしい範囲に反作用システムの多数の準備によって引き起こされる操作および実験間違いの間に避ける。、反作用システムの容積半分だけ（反作用システムが使用するとき20μlなら例えば、取得10μl 2×RT-PCR EasyTM組合せの解決）、RNAの型板および特定のプライマーの適切な量を加え、容積を構成するためにRNaseなしのddH2Oを加える。特定のRT-PCRの反作用システム準備のために表1を次参照しなさい。

形態1:RT-PCRシステム準備

1*:通常プライマーの最終的な集中はよりよい結果を得る0.2-0.25μMである。反作用の性能が粗末なとき、プライマー集中は0.1-0.5μMの範囲の内で調節することができる。

注:前方プライマーおよび逆のプライマーはターゲット遺伝子のための特定のプライマーである;50μlシステムは、試薬の適量を比例して調節するために20μlシステムを示す。

C:RT-PCRの反作用プログラム配置

• 上のテーブルについてのRT-PCRシステムを、組合せ穏やかに準備した後（穏やかに吹くのにピペットの先端を使用できる;また管の壁か管の帽子で、および場所後で使用できるように分散する液体を集める冷蔵庫のvortexerおよび遠心分離機で簡潔に混合できる）。

2. RT-PCRの反作用プログラム設定（反作用の温度そして時間を置く表2）を参照しなさい。

注:2×RT-PCR EasyTMの組合せの活動を保障し、拡大の効率を改善するために、PCRの器械プログラムを置いた後RT-PCRの反作用システムを準備することが最善であるシステムが準備される直後に反作用プログラムが入れることができるように。

形態2:RT-PCRの反作用システム設定

注:上記のプロシージャは参照だけのためである。実際の反作用の状態は型板、プライマー、等の構造条件によって変わる。複雑な二次構造が付いているRNAの型板のために、逆のトランスクリプションの第一歩のための反作用の温度は50°C.であるために推薦される。特定の操作では、ターゲット片のサイズの特定の条件に従って最適の反作用の条件を、焼きなましの温度を含んで、延長時間、等、増幅された片の基礎順序設計することは、必要およびプライマーのGCの内容および長さである。
RT-PCR操作の図表

Foregeneの逆Transcriptase

Foregeneの逆のtranscriptaseは非常に能率的な、特定の逆のトランスクリプション反作用を提供できる。逆のtranscriptaseは高い類縁を表わし、まだ50°C.の反作用の温度でよい逆のトランスクリプション活動を維持する。それは転写する他の扱う逆のtranscriptasesがことができない複雑な二次構造が付いているRNAをよく逆転できる。Foregeneの逆Transcriptaseに高い感受性があり、RNA量（0.1pg≤RNA≤1μg）の広い範囲で適当である。

Foregene HotStar TaqのDNAポリメラーゼ

PCRの非常に特定の拡大を提供する。逆のトランスクリプションが進行中のとき、DNAポリメラーゼは完全に非効果的で、逆のトランスクリプション反作用を妨げない。94°Cに熱されるPCRの反作用プログラムの後でDNAポリメラーゼは活動化させ、逆のtranscriptaseは不活性になる。ホット スタート プロセスは最初の周期の無指定の焼きなましのプライマーそしてプライマー二量体の形成を除去し、PCRの拡大の高い特定性そして信頼性を保障する。

注意:（キットを使用する前に注意を注意深く読みなさい）

- 試薬は繰り返された凍り、分解を避けるべきである他では試薬の性能は無効に減るか、またはなる。

- 貯えられる-80℃で新しいサンプル抽出か型板のRNAを使用することを推薦する（RNAは繰り返された凍り、分解を避けるべきである）。

- RNaseの汚染を避けるためには、実験操作はRNaseなしのスペースで行われるべきである;ピペットの先端および使用されるPCRの管はRNaseなしでなければならない;そして使い捨て可能な手袋およびマスクは身に着けられているべきである。

- このキットは実験のために特定のプライマーによって使用されなければならない。遺伝子が実験の必要性に従って増幅されることができるように特定のプライマーを選びなさい。

- 使用の前に、氷の溶解、軽打および組合せの使用に2× RT-PCR EasyTMの組合せをよりかなり前に完全に置きなさい;システムの準備は氷浴でキットの性能およびPCRの拡大の特定性を改善するために作動するべきである。

- 氷浴

自己準備された試薬

- RNAの型板

- 遺伝子特定のPCRのプライマー

安全

       - このプロダクトは科学研究の使用だけのため、薬、臨床薬、食糧および化粧品でそれを使用しない。

       - 化学薬品を使用する場合の摩耗の適した実験室の衣服、手袋、保護ガラス、等。

否定的な制御に余りに高い蛍光性の価値がある

1. 操作の間に引き起こされる試薬の汚染。

推薦:RT-PCRの実験のための新しい試薬と取り替えなさい。

2. 汚染はPCRの反作用システムの準備の間に行われた。推薦:操作の間に必要な保護対策を、のような取りなさい:フィルター、等のピペットの先端を使用して身に着けている乳液の手袋。

3. プライマーは低下し、プライマーの低下は無指定の拡大をもたらす。

提案:プライマーが低下する使用し、RT-PCRの実験のための新しいプライマーによってそれらを取り替えなさいかどうか検出するのにSDS-PAGEの電気泳動を。

量的な価値の悪い反復性

1. 器械は故障している。

提案:温度の管理か検出の間に悪い再現性に終ってPCR機械の各PCRの穴間に間違いが、あるかもしれない。

対応する器械の指示に従ってテストを遂行しなさい。

2. サンプル純度はよくない。

推薦:不潔なサンプルは型板およびプライマーの純度を含んでいる実験の悪い再現性をもたらす。型板をrepurify最善でありプライマーはSDS-PAGEによって最もよく浄化される。

3. PCRシステム準備および貯蔵時間は余りに長い。

提案:RT-PCRシステムを準備の直後のPCRの実験のために使用し、余りに長くのための残してはいけない;RT-PCRシステム準備との進行の前にPCRプログラムをセットアップすることを推薦する。

4. PCRの拡大の状態は適していないし、プライマー順序か集中は不適当である。

提案:プライマー順序の正しさを確認すればプライマーは低下しなかった;拡大信号がよくないとき、焼きなましの温度を調節し、プライマー集中を適切に調節することを試みなさい。