ゲノムDNAの浄化のための動物組織DNAの分離のキットDE-05011/05012/05013

動物組織DNAの分離のキットCat.No.DE -培養された細胞および動物からのゲノムDNAの浄化のための05011/05012/05013

動物組織DNAの分離のキット

Cat.No.DE - 05011/05012/05013

培養された細胞そして動物組織からのゲノムDNAの浄化のため

プロダクトDescprition:

このキットはとりわけDNA、Foregeneのプロテアーゼおよび独特な緩衝システムを結合できるDNAだけコラムを使用する。良質のゲノムDNAは30から50分以内のさまざまな培養された細胞そして動物組織から得ることができる。

回転のコラムで使用されるDNAだけケイ酸ゲルの膜は効果的にそしてとりわけDNAに最大にするできる結合で細胞のRNA、不純物蛋白質、イオンおよび他の有機化合物の取り外しをForegeneの独特で新しい文書。5-80μg良質のゲノムDNAは10-50mgティッシュから浄化することができる。

プロダクト部品:

Features&advantages:

- RNaseの汚染無し:DNAだけコラムはキットでするそれにより実験室が外因性のRNaseによって汚染されることを防ぐ実験の間に付加的なRNaseなしでゲノムDNAからRNAを、取除くことを可能に提供した。

-最高速度:Foregeneのプロテアーゼに同じようなプロテアーゼおよびダイジェストの組織サンプルより高い活動がより速くある;

-簡単:ゲノムDNAの浄化操作は50分に完了することができる。

-便利:遠心分離は室温、4℃遠心分離で行われ、DNAのエタノールの沈殿物は要求されない。

-安全:有機性試薬は使用されない。

の高さの質:浄化されたゲノムDNAに大きい片、RNA、RNaseおよびさまざまな実験の条件を満たすことができる極端に低いイオン内容がない。

ゲノムDNAの適用:

ゲノムDNAは動物組織DNAの分離のキット持ち、高い純度を定期的な分子生物学操作に、のような使用することができる浄化した:酵素の消化力、PCR、南交配、図書館の構造および他の実験。

プロダクト品質管理:

FOREGENEの総合的品質管理システムに従ってキットの各バッチの質の信頼性そして安定性を保障する、動物組織DNAの分離のキットの各バッチは厳しく多数の時テストされる。

ゲノムDNAの抽出収穫および純度:

動物組織ゲノムDNAの抽出の収穫はティッシュの源、貯蔵条件、貯蔵時間、適量および他の要因と関連している。得られたゲノムDNAの純度は定期的な分子生物学実験操作に会い、OD260/280は1.7-1.9の間にある。このキットを使用して得られるゲノムDNAの収穫は次のテーブルで示されている:

注意:（キットを使用する前に注意を注意深く読むこと確実であるため）

- サンプルは繰り返された凍り、分解を避けるべきである他では得られたDNAの片はより小さく、抽出の収穫は減る。

- キットを注意深く緩衝L1、緩衝L2および緩衝PWに沈殿物があるかどうか確認するのに使用する前。沈殿物があれば、それを37℃の組合せのでよりかなり前に分解するため使用。

- キットを使用する前に、緩衝WBが指示に従って無水エタノールと加えられるかどうか確認すること確実でであって下さい。緩衝WBは60ml無水エタノール（DE-05011）、120ml無水エタノール（DE-05012）および使用の前の300ml無水エタノールと（DE-053013）加えられた。

- 溶出容積:緩衝EBは100μlよりより少なくあるべきではない、他ではDNAの収穫に影響を与える。

- あらゆる緩衝にRNaseを加えないことを覚えなさい。

- すべての遠心分離のステップは室温（15-25℃）でデスクトップの遠心分離機を使用して遠心分離機にかけられる。

- すべての実験ステップは室温（15-25℃）で遂行された。

貯蔵および保存性:

- キットは室温（15-25℃）の12か月、または長い時間の2-8℃のために貯えることができる。

注:低温で貯えられたら、解決は沈殿物に傾向がある。使用の前、室温にキットに解決をしばらく置くこと確実であるため。必要ならば、沈殿物を分解するために10分の37℃湯せんのそれを予備加熱し使用の前に混合しなさい。

- Foregeneのプロテアーゼの解決に独特な方式があり、室温で長い間活発（3か月）である;4℃で貯えられたときその活動および安定性はよりよい、従って-20℃の保存でそれを貯えないことを覚えている4℃でそれを貯えることを推薦する。

DNAだけコラムの特性

*:100μlの最低の溶出システムはDNAの回復率および集中を考慮して与えられる適度な推薦された容積である。DNAの収穫を増加するために、溶出液の容積が適切に増加することができれば;浄化されたDNAの集中を高めるために、DNAの高い濃度を得るために溶出液の容積が50μl溶出システムの使用のようなDNAの収穫の一部分を、犠牲にすることの前提で適切に減らすことができれば。

ゲノムDNAの抽出収穫および純度

動物組織ゲノムDNAの抽出の収穫はティッシュの源、貯蔵条件、貯蔵時間、適量および他の要因と関連している。得られたゲノムDNAの純度は定期的な分子生物学実験操作に会い、OD260/280は1.7-1.9の間にある。このキットを使用して得られるゲノムDNAの収穫は次のテーブルで示されている:

注:このテーブルのデータは参照だけのためである。実際の操作では、得られたデータは使用された材料の貯蔵条件そして作動の実力のような要因によるこのテーブルのデータとわずかに異なる。

ワークフロー

問題解析ガイド

次はあなたの実験に有用であることを望む組織サンプルからのゲノムDNAの抽出で見つけられるかもしれない問題の分析である。さらに、操作の指示および問題解析以外の他の実験か技術的な問題のために、私達は助けるためにテクニカル サポートを捧げた。必要性があったら、私達に連絡しなさい:028-83360257またはEマリ:Tech@foregene.com。

低い収穫かDNA無し

通常サンプル源、サンプル貯蔵条件、サンプル前処理、処理、等を含むゲノムDNAの収穫に、影響を与える多数の要因がある。

ゲノムDNAは抽出の間に得ることができなかった

1. 組織サンプルはゲノムDNAの低下に終って余りに長いのために不適当に、貯えられるか、または貯えられる。

推薦:液体窒素または-80°Cの店の組織サンプル;集めたゲノムDNAの抽出のための組織サンプルを最近使用するために試みなさい。

2. ほんのわずかのティッシュの消費は対応するゲノムDNAを得る失敗をもたらすかもしれない。

提案:長い間貯えられるか、または厳しいゲノムDNAの低下があるかなりのゲノムDNAを得るために組織サンプルのために、組織サンプルの量は適切に増加することができる。サンプルの量はDNAの必要性に従って定めることができる50mgを超過するべきではない。

3. 減らされたか、または不活性にされた活動のForegeneのプロテアーゼの結果の不適当な貯蔵。

推薦:Foregeneのプロテアーゼの貯蔵条件を確認するか、または酵素の加水分解のためのForegeneの新しいプロテアーゼとそれを取り替えなさい。

4. キットは余りにも長いのために不適当に貯えられか、または貯えられ、失敗するにはある部品をキットでもたらす。

推薦:関連操作のための新しい動物組織ゲノムDNAの抽出のキットを購入しなさい。

5. キットの不適当な使用。例えば、あるティッシュは処理のための特別なキットを必要とする。

推薦:土ゲノムDNAの抽出のようなサンプルのためのキットを、購入することは、熱心な土DNAの分離のキットを購入することを要求する。

6. 無水エタノールを加えないで緩衝WB。

推薦:無水エタノールの正しい容積をWBを緩衝するために加えることを確かめなさい。

7. 溶離液は無水ケイ酸の膜にきちんと滴らなかった。

提案:予備加熱された溶離液を65°Cでケイ酸ゲルの膜の中間にdropwise加え、5分の室温で溶出の効率を高めるために残しなさい。

低い収穫が付いている得られたゲノムDNA

1. サンプルはゲノムDNAの低下に終って余りに長いのために不適当に、貯えられるか、または貯えられる。

推薦:液体窒素または-80の店の組織サンプル;集めたゲノムDNAの抽出のための組織サンプルを最近使用するために試みなさい。

2. 組織サンプルの量が余りに小さければ、得られたゲノムDNAはより少なくある。

提案:長い間貯えられるか、または厳しいゲノムDNAの低下があるかなりのゲノムDNAを得るために組織サンプルのために、組織サンプルの量は適切に増加することができる。サンプルの量はDNAの必要性に従って定めることができる50mgを超過するべきではない。

3. サンプルの余分な量は不完全な消化力および不完全な遠心分離をもたらす。浄化のコラムはコラムの遠心分離の間に妨げられるかもしれ得られたゲノムDNAはより少なくある。

提案:異なったティッシュに従って、適量は10-50 mgの内で調節されるべきである。消化力が不完全なかまたは浄化のコラムが妨げられるとき、対応するティッシュの適量を減らしなさい。

4. サンプルは不完全に調査分析されないし、調査分析されない。

提案:酵素の加水分解の反作用がより完全に遂行することができより高い収穫ゲノムDNAが得ることができるようにまたはプロテアーゼの活動に影響を与える要因サンプル保存の解決を取除くことができる酵素の加水分解の前に特に維持されたサンプルがある比較的特別なサンプル前処理をされる。

5. パラフィン埋め込まれた、ラット テール、等のような特別な維持された組織サンプル。

推薦:熱心なゲノムDNAの抽出のキットを、パラフィン埋め込まれたサンプルのような、FFPE DNAの分離のキットを選ぶことができる購入しなさい;マウスの尾サンプル、マウスの尾DNAの小型キットを選ぶことができる。これらのティッシュは特別なキットと扱われ、DNAの抽出の収穫はより高く、効果はより理想的である。

6. 減らされたか、または不活性にされた活動のForegeneのプロテアーゼの結果の不適当な貯蔵。

推薦:Foregeneのプロテアーゼの貯蔵条件を確認するか、または酵素の加水分解のためのForegeneの新しいプロテアーゼとそれを取り替えなさい。

7. 溶離液問題。

推薦:溶出のための使用緩衝EB;ddH₂ Oか他の溶離液を使用して、確かめなさい溶離液のpHは7.0-8.5の間にある。

8. 溶離液はdropwise正しく加えられなかった。

提案:溶出の低下を無水ケイ酸の膜の中間に加え、5分の室温で溶出の効率を高めるために残しなさい。

9. 溶離液の容積は余りに低い。

提案:指示に従ってゲノムDNAの溶出、100μlよりより少しのために溶離液を少なくとも使用してはいけない。

低純度の得られたゲノムDNA

ゲノムDNAの低純度は下流の実験の失敗か不十分な効果を、のようなもたらす:酵素は切りターゲット遺伝子の片はPCRによって得ることができない。

1. 雑多な蛋白質の汚染、RNAの汚染。

分析:緩衝PWがコラムを洗浄するのに使用されなかった;緩衝PWが正しい遠心分離の速度でコラムを洗浄するのに使用されなかった。

推薦:上澄みがコラムを通して渡されるとき上澄みに沈殿物がないことを確認することを試みなさい;指示に従って緩衝PWが付いている浄化のコラムを洗浄することを忘れないでいればこのステップは省略することができない。

2. 不純物イオン汚染。

分析:緩衝WBの洗浄コラムは残りのイオンの汚染に終ってだけ、一度省略されるか、または洗浄された。

推薦:残りイオンをできるだけ取除く指示に従って緩衝WBと二度洗浄することを忘れないでいなさい。

3. RNaseの汚染。

分析:外因性のRNaseは緩衝に加えられる;下流のRNAの実験操作に影響を与える生体外のトランスクリプションのような残りのRNaseの不正確な緩衝PWの洗浄操作の結果。

提案:Foregeneシリーズ核酸の抽出のキットは付加的なRNaseなしでRNAを取除くことができ動物組織DNAの分離のキットのすべての試薬はRNaseを必要としない;指示に従って緩衝PWが付いている浄化のコラムを洗浄することを忘れないでいればこのステップは省略することができない。

4. エタノールの残余。

分析:緩衝WBが付いている浄化のコラムを洗浄した後、空の管の遠心分離は行われなかった。

推薦:適切な空の管の遠心分離のための指示に続きなさい。

5. 他の不純物の汚染。

分析:救われたサンプルか特別なサンプルは調査分析されなかった。

推薦:完全に操作指示に従ってサンプルに前処理をしなさい。